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shRNA表达克隆

RNAi的传递方案

May 06, 2008 No Comments

(III)RNAi的传递方案

       RNAi至少在实验室试管中的效力是比较强的。但稳定性及传递性是阻碍RNAi疗法成功的主要障碍,也是RNA自身生物化学本质以及机体抵御外来核酸侵染的障碍。Stein指出:“鉴于此,我们不能置之不理。”研究基于RNA的疗法已有15年的John Rossi表示:“问题是一个带电荷的寡聚核苷酸不会穿透脂质层,”但只有这样,它才能进入细胞。他说:“细胞不想吸收RNA”,这就赋予了进化意义,因为细胞外的RNA通常预示着病毒侵染。把未经修饰的RNA导入血管,它很快就被肾脏排泄出去或被酶降解。

       为了解决细胞渗透的问题,很多研究人员将RNA与脂类相结合或修饰RNA的磷酸骨架从而令其电量最小化。Mahanthappa认为RNA与脂类结合得到的溶液不可能是单纯溶液,而事实上药物审批要求对脂质传递系统单独测试。另一方面,Alnylam公司则支持骨架修饰的方法。Mahanthappa表示:“越来越有必要对RNA进行小范围的修饰,从而增加细胞对它的吸收并加强它在血流里的稳定性。”他说:“我们从反义药物研究方面学到的是:即使没有其它传递策略,当你投放充足剂量的RNA,如果它稳定,它就会被细胞吸收。

       高级调查员Judy Lieberman认为:“任何能提高循环半衰期的方法都能促进传递。”但同时,她警告说这可能不是唯一的问题。Lieberman的实验室最近证明,RNAi沉默老鼠Fas基因表达的机制,也能防止它们罹患爆发性肝炎。面对各种各样的细胞创伤,Fas会诱发细胞凋亡或程序性细胞死亡。在她的实验中,Lieberman采用高压注射法把RNA送入老鼠尾部。RNA进入肝部沉默Fas,并保护老鼠不受肝炎侵扰。然而,很大一部分老鼠最后死于心脏衰竭,因为药物注射的容量占了老鼠血容量的20%左右。这种传递方案很明显不适用于人类。Lieberman解释:“把RNA安全送入细胞仍然是具有一定难度。除非你真的十分关注如何解决这个问题,并付出努力,否则你将原地踏步毫无进展。”

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