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shRNA表达克隆

新发现的原癌基因

Jul 15, 2008 No Comments

新发现的原癌基因

        研究人员最近在对人类miRNA的功能进行筛选时发现其中有两种miRNA属于原癌基因。Reuven等人证明了miR-372和miR-373与原癌基因Ras一起发挥作用以克服因细胞缺失p53基因所带来的影响,且该过程发生在一些生殖细胞肿瘤中。

       研究人员构建了一个载体库,用来表达大部分人类miRNA的克隆,同时他们还构建了一块芯片以探测这个库中成员的表达情况。随后他们将这个库中的基因和原癌基因Ras一起通过病毒载体转染进培养中的成纤维细胞中去。含野生型p53基因的细胞应答原癌基因Ras会发生细胞凋亡,细胞缺失p53则可以抵抗衰老的产生。然而,两种miRNA-miR372和miR-373(这两种mcroRNA是同源的)却可以让细胞继续增殖。

       这些结果已经经过实验的验证,并且进一步的研究表明转染了这些miRNA的细胞发生衰老的几率明显降低,不仅如此,即便与那些没有原癌基因Ras的细胞相比,它们的存活期也要更长。

       为研究这两种microRNA的作用机理,研究人员检测了p53基因在这些转染了microRNA后的细胞中的表达水平及其活性。与预期的不同,他们发现p53在这些细胞中的水平和活性并未发生变化,而细胞周期依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase, CDK2)的活性也没有降低。正常情况下,p53会发生活化以对原癌基因Ras进行应答,进而抑制CDK2的活性,但这一抑制过程却可以被miR-372和miR-373解除。那么介导此效应的miRNA直接的靶位点又是什么呢?

       研究人员对那些通过基因芯片研究发现的受miRNA下调调控的基因中miRNA的靶序列进行了分析,发现其中最有可能的靶基因是肿瘤抑制因子LATS2。免疫印迹实验表明了LATS2确实是miRNA的靶点,而对该基因3′ UTR的荧光素酶报告基因的检测结果也显示LATS2的表达是直接被这两种miRNA所抑制的。研究人员推测该过程可能是miRNA抑制反应过程中的最初的一步。

       那么miR-372和miR-373对癌症患者的肿瘤生长是否也有作用呢?研究人员为此专门选取了p53表达量丰富的生殖细胞肿瘤(TGCTs)的原代细胞和细胞系,对这些细胞中miR-372和mir-373的表达情况进行了观察,结果发现其中绝大部分细胞都表达这两种miRNA,而所有的这些细胞都含有野生型的p53。有趣的是,在所检测的四种肿瘤中有两种可以使TP53基因的突变子失活,但这两种肿瘤却不表达这些miRNA,而其它肿瘤却鲜有类似的情况发生。相比之下,体细胞肿瘤中则很少表达这些miRNA。

       以上结果说明了一种含野生型p53基因的肿瘤逃避细胞死亡的新机制。虽然这种扮演致癌因子角色的miRNA数量的多少还有待研究确证,但目前的研究至少为今后对肿瘤生成中其它miRNA的作用的研究提供了一个平台。

原文检索:Nature Reviews Cancer归尘/编译

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